抗体的多样性:每种基因片段是以多拷贝的形式存在,其中编码重链V区的VH、DH和JH的基因片段数分别为50、23和6个;编码K轻链V区的Vx和JK基因片段数分别为60和5个,编码入轻链V区的VX和J入基因片段数分别为30和7个。这些基因在胚系阶段以分隔的形式存在。在B细胞的分化发育过程中,这些基因片段发生重排和组合,从而产生数量巨大、能识别特异性抗原的BCR。每种具有特异性BCR的B细胞克隆可识别相应的抗原,产生一种特异性抗体。Ig基因重组是B细胞合成无数特异性抗体的主要原因。单克隆抗体的生产过程需要大量的细胞培养和纯化步骤。上海专业抗体研发制造
抗体主要功能:中和有害素和阻止病原体入侵Ig单体可结合2个抗原表位,为双价。SIgA是二聚体,可结合4个抗原表位,为4价。IgM是五聚体,理论上可以结合10个抗原,应该是10价,但由于立体构象的空间位阻,使IgM一般只能结合5个抗原表位,故为5价。抗体的V区与抗原结合后,借助于c区的作用,在体外可发生各种抗原抗体结合反应,有利于抗原或抗体的检测和功能的判断;在体内可中和有害素、阻断病原体入侵、去除病原微生物;B细胞膜表面的IgM和IgD构成B细胞的抗原识别受体,能辅助B细胞特异性识别抗原分子。北京IgD抗体抗体在婴儿期主要来自于母体传递,随着年龄的增长,婴儿自身的抗体产生能力逐渐增强。
抗体主要功能:启动补体产生攻膜复合物使细胞溶解破坏。人IgG1~3和IgM与相应抗原结合后,可因构象改变而使其CH2和CH3结构域内的补体结合点暴露,从而通过经典途径启动补体系统,产生多种效应功能,其中IgM、IgG1和IgG3启动补体系统的能力较强,IgG2较弱。IgA、IgE和IgG4本身难以启动补体,但在形成聚合物后可通过旁路途径启动补体系统。通常情况下,lgD不能启动补体。调理吞噬和ADCC:IgG可通过其Fc段与表面具有相应受体的细胞结合,产生不同的生物学作用。
抗体(antibody,Ab):是由抗原进入机体刺激B细胞分化增殖为浆细胞而合成并分泌的一类能与相应抗原发生特异性结合并产生免疫效应的含有糖基的球蛋白。抗体分布于体液(血液、组织液及粘膜的外分泌液)中,主要存在于血清内。1964年世界卫生组织召开会议,将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。免疫球蛋白除分布于体液中之外,还可存在于B细胞膜上。现代免疫学认为,抗体与免疫球蛋白是等同的概念;只是抗体侧重于其生物学活性的描述,而免疫球蛋白侧重强调其化学结构。多克隆抗体可以通过融合细胞和单克隆化技术转变为单克隆抗体。
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的小鼠骨髓瘤细胞中DNA的从头合成途径会被阻止;未融合的骨髓瘤细胞又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶(HGPRT),不能利用补救途径合成DNA;这样未融合小鼠骨髓瘤细胞的两个DNA合成途径都被阻止,骨髓瘤细胞DNA不能复制而死亡。 未融合的B淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从B淋巴细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,可以通过补救途径合成DNA,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此,杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活和增殖。由于多克隆抗体来源于不同的细胞克隆,其亲和力和特异性可能会有所不同。广州IgE抗体费用
多克隆抗体可以提供更高的信号强度,因为多个细胞克隆同时产生抗体。上海专业抗体研发制造
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,极大提高了抗体的生产量。上海专业抗体研发制造
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