免疫沉淀(又叫免疫沉淀(IP)) 免疫沉淀是很有价值的研究工具,目的是研究某一特定蛋白的关键信息,包括:小规模蛋白纯化用于功能研究,N-端序列分析,蛋白-蛋白相互作用的研究,细胞或组织中蛋白相对丰度和分布的测定。免疫沉淀分析法的成功取决于两个主要因素:原始样品中抗原的丰度和抗体对该抗原的亲和力(一般需要108 M-1或以上的亲和力)。在开始免疫沉淀之前,确保特定的步骤有适当的实验对照。对照抗体在性质上尽可能与该特异性抗体类似。上海益启生物抗体订购方便。青浦区H3抗体抗体联系方式
在保存抗体时请注意以下几点: 为保持比较大反应性,应按照厂家说明书保存试剂(如,当指定保存温度为2-8℃时,应避免将抗体置于室温下)。保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。除非加入稳定蛋白,如BSA(1% w/v),否则抗体不得 在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。保存时遇到的主要问题是细菌或***污染。 如果抗体保存在2-8℃超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。静安区组蛋白抗体抗体代理价上海Sigma抗体的供应商。
不均匀样品,如混浊液、样品中有颗粒节 样品和标准品混匀不亮分移液器加样不准 移液器在样品和/或标准品使用时存在题留 在解育过程中试剂混合不充分洗涤不充分 液体蒸发 稀释倍数的计算不正确修改实验程序样品处理不正确 处理办法: 确保只使用特定批次的试剂进行实验。 检查所用的实验稀释度(按国说明书推荐的稀释度进行实验)检查横孔板分光光度i计中的渡长。 检查在产品说明书中该批次的阐育时间。(酶底物的解育时间用于20-28℃范围内)
这是为了避免或尽量减少冻融循环。抗体溶液不可反复冻融,因为这可以导致抗体。 聚集,从而引起活性丧失。因此,贮存溶液应在保存前先进行分装。未稀释抗体应在保存于-20℃之前分装,以尽量减少可使抗体变性的反复冻融循环。集中保存抗体可预防或尽量减少降解。可在抗体溶液中加入终浓度为50%的冷冻保护剂,如甘油,以预防冻融造成的损失。请勿将含甘油的抗体保存于-80℃。通常不对酶结合抗体进行冷冻,以免损失酶活性及其结合能力。上海益启生物的联系电话。
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比较好将其保存于+4℃。抗体上的荧光素较易感光淬灭。因此,荧光结合抗体应在 深色瓶中避光保存。长期保存时,某些抗体溶液可能产生不溶的成分。沉淀物可通过10000 g快速离心去除。 抗体的应用与优化 在19世纪末期,人们认识到了特异性抗体-抗原相互作用的价值,进而多种免疫技术问世,其中大多数目前仍在应用。从分析血液成分的沉淀素试验,到高度特异性的染色质免疫沉淀技术,再到使用自动化成像流式细胞仪上进行的免疫染色实验,以抗体为基础的工具在生物学和生物医学研究中一直起着重要的作用。青浦区H3抗体抗体联系方式
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