[VIP第1年] 指数:3
上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂，黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物。上述任一所述复合扩增体系可为20μl，由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna，黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法；该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤，黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：。迈杰转化医学开发的伴随诊断试剂盒,基因突变检测试剂盒,检测范围全。黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询
P7的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG3’。PCR总体系为：2倍PCRMix15uL，10umol/LP71uL，1umol/LOP1uL或OP2uL，DNA5uL，NFW5uL。上述技术方案中，作为推荐，所述步骤4中的PCR总体系10uL具体为：VAHTSSYBRqPCRMasterMix5uL，qPCRPrimerMix1uL，DNA2uL，ROXReferenceDye2，NFW5uL。上述技术方案中，作为推荐，所述的***轮PCR扩增循环数目为10-14。上述技术方案中，作为推荐，所述的第二轮PCR扩增循环数目为10-14。本发明的优点和有益效果在于：提供一种基于多重PCR的二代测序建库技术。在二代测序过程中采用该技术则不需要再购买商业的建库试剂盒，所有反应试剂都可以单独购买组合，极大的降低了实验成本。另外由于在PCR过程中固定了一端的通用引物，极大的降低了多重PCR反应体系中的引物种类和数量，可以有效的抑制非特异性扩增和引物之间的相互干扰，也降低了不同引物间的扩增效率的差异。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图**是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询迈杰多平台的研究优势以及多组学数据的挖掘能力，促进产学研医结合，加速项目成果转化，创新科技产品研发。
本发明属于法医学技术领域，具体涉及基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒及其使用的引物组合，尤其涉及基于二代测序技术检测67个y-str基因座和amelogenin基因座的试剂盒及其使用的引物组合。背景技术：短串联重复(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重复单位串联组成且***存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的dna序列，是目前法医个体识别和亲子鉴定应用*****的遗传标记。人类y染色体短串联重复(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遗传、缺乏重组、分型简单、信息量大、多态性高等特点，是研究人类的起源进化、民族差异、种族差异、群体及地区分布等的有力工具。因此，y染色体str基因座多态性研究可为法医学个体识别和亲权鉴定提供重要手段，在诸如父系家族的亲权鉴定、混合斑男性成分的检测、不同男性个体混合物的分析、追溯父系迁移历史及重构同一父系家族等方向都具有独特的应用价值。目前，荧光标记多重扩增结合毛细管电泳(fluorescentlabeledmultiplexpcr-capillaryelectrophoresis，pcr-ce)是str分型的主流技术；常用的商业化y-str分型试剂盒有y23(promega)、y(promega)、yfiler(thermofisherscientific)和yfilerplus。
上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物。上述任一所述复合扩增体系可为20μl，由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法；该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：。 迈杰转化医学严格按照IS013485标准规定建立质量体系。
同时操作更为简单，整个上机测序可在（文库构建时间除外）。其劣势在于芯片的通量并不高，非常适合小基因组和外显子验证的测序。小结：二代测序相比一代测序大幅降低了成本，保持了较高准确性，并且大幅降低了测序时间，将一个人类基因组从3年降为1周以内，但在序列读长方面比起***代测序技术则要短很多，这也给三代测序提供了发展空间。三、独辟蹊径补空缺三代测序：单分子测序背景：测序技术经过***代、第二代的发展，读长从一代测序的近1000bp，降到了二代测序的几百bp，通量和速度大幅提升，那么第三代测序的发展思路在于保持二代测序的速度和通量优势同时，弥补其读长较短的劣势。三代测序与前两代相比，**大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增。1、Oxfordnanopore纳米孔+电流检测技术原理：该技术设计了一种特殊的纳米孔，孔内共价结合有分子接头，**终得到电信号而不是光信号或pH信号的测序技术。当DNA碱基通过纳米孔时，电荷将发生变化，因而短暂地影响流过纳米孔的电流强度（每种碱基所影响的电流变化幅度是不同的），灵敏的电子设备检测到这些变化从而鉴定所通过的碱基。优势劣势：①读长很长，大约在几十kb，甚至100kb；②错误率目前相比较高。迈杰与大学，研究院所，医院的科研人员进行科研转化研究合作,包括基础科学研究及临床应用研究等。河北标准迈杰转化医学NGS平台创新服务
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目前市场上**成功的商业化多重PCR建库技术是ThermoFisher公司的Ampliseq技术，该技术可以在同一孔反应中完成上千对引物的扩增，使得多个靶标区域的富集可以通过一次PCR反应完成，随后加上IonTorrent测序平台的通用接头建好文库用于二代测序。然而，这个产品存在**大的缺陷是客户定制化的panel设计生产周期较长，需要两到三个月，严重的增加了时间成本；并且每个样本的建库费用高达1000-2000元，致使其经济成本极高；另外该试剂盒只适用于IonTorrent测序平台，受平台因素影响大，亦不利于测序费用的降低。技术实现要素：鉴于以上问题，本发明提供了一种基于多重PCR的二代测序建库技术，该技术可以有效的解决Ampliseq试剂盒存在的问题，对于客户定制化的panel设计生产周期只需要两周，并且可以极大的降低单个样本建库的成本，且在IonTorrent和Illumina测序平台都通用。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明中用到了两轮多重PCR来建库。首先针对每个靶标区域或者靶标位点，需要设计两条特异性引物，一条引物在另一条引物的3’下游100-150bp的位置，处于下游的引物在5’端加上二代测序平台通用的测序接头。上游的引物OP用于***轮多重PCR。黑龙江多靶点迈杰转化医学NGS平台推荐咨询
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