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Westem HRP基材。高背景分锁不足更改为不同的阻止解决方案。吸笔架不够湿组装前，先将吸墨纸架弄湿。阻塞解决方案可能有始终准备新鲜的0.5％脱脂/低脂干奶。降级的抗体浓度过高降低抗体的浓度。吸笔架朝上放置将印迹架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗涤不足进行至少4次每次30 mL的洗涤。添加清洗剂时，确保真空连续运行缓冲。整个系统电平不一致的信号确保系统在平坦的水平表面上。污点抗体不均匀补充封闭液和抗体稀释剂遍及整个表面0.1％Tween 20表面活性剂。吸墨纸架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整个印迹中的抗体。应用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印迹）抗体。抗体体积低没有抗体回收盘确保抗体中的孔，回收托盘algn益启生物是默克细胞计数器的代理商。普陀区Merck细胞分析仪Merck仪器联系人
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关闭真空。同样，溶液将被吸收到印迹架中，并且表面可能看起来干燥。重要提示：孵育10分钟后，再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟，直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液（对于MultiBlot为15 mL）。重复洗涤步骤3次（共3次）4次洗涤）。12.关闭真空，然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点，并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白，则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育：一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL（对于MultiBlot），5 mL（对于Mini blot）或10 mL（对于Midi blot）1X一抗（浓缩液）通常在标准免疫检测过程中使用）。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话，将其从底座采购细胞跨膜电阻仪哪家靠谱？虹口区Merck超滤杯Merck仪器哪家优惠
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15分钟。图4.扩展孵化（过夜）：SNAP i.d.8 2.0系统与标准免疫检测一种。 SNAP id.o 2.0蛋白检测b。标准系统Midi印迹免疫检测将A431细胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）转移至Immobilon9-P膜。两种印迹均用在TBST中制备的0.5％NFDM封闭。这SNAP i.d.c 2.0 Midi印迹被阻断20秒，标准印迹为分锁了1个小时。两种印迹均与相同稀释度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，对于HRP偶联的二抗山羊抗兔（AP132P），将SNAP i.d.2.0印迹孵育10分钟在TBST中洗涤3次后，将标准印迹孵育1小时。 图5.扩展孵化（1小时）：，SNAP i.d.o 2.0系统1小时协议与SNAP i.d.9 2.0系统标准协议与标准免普陀区Merck细胞分析仪Merck仪器联系人
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